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　　　　　　2021-10-11　　　　分娩征兆　　　　84　　羊水破了多久要生　　羊水破了多久要生？一般情况下，羊水破后24小时就会生产，12小时后要用抗生素防止感染，24...　　　　　　2021-10-08　　　　分娩征兆　　　　71　　没到预产期就破水了该怎么办　　没到预产期就破水了该怎么办？一旦出现不到预产期就发生羊水破裂的情况，一定要到医院及时进行治...　　　　　　2021-10-08　　　　分娩征兆　　　　149　　羊水破了没有宫缩怎么办　　羊水破了没有宫缩怎么办？羊水破裂之后就会出现宫缩，而且宫缩会越来越频繁，越来越规律，这就预...　　　　　　2021-10-08　　　　分娩征兆　　　　128　　孕妇临盆前有什么征兆　　　　下面有喜网将促排卵后20天各天的身体反应情况与大家汇总，希望对大家有用。　　促排卵后20天每天的身体反应汇总促排卵第1天促排卵第2天促排卵第3天促排卵第4天促排卵第5天促排卵第6天促排卵第7天促排卵第8天促排卵第9天促排卵第10天促排卵第11天促排卵第12天促排卵第13天促排卵第14天促排卵第15天促排卵第16天促排卵第17天促排卵第18天促排卵第19天促排卵第20天　　1、试管婴儿促排卵期间应保持心情舒畅，不要过分紧张、焦虑和担心;　　2、该期间应避免跑步、体育锻炼等剧烈运动和重体力劳动，日常工作和活动不受限制;　　3、注意休息，促排期间作息要规律，不能熬夜。熬夜不利于卵泡和内膜的生长，应做到早睡早起，保持平和的心态和良好的睡眠;　　4、促排卵过程中，不建议同房，尤其在中、后期，此时有多个卵泡发育，卵巢增大，同房或剧烈运动可能会引起卵巢扭转、卵泡破裂等风险;　　5、饮食无特殊要求，合理均衡饮食即可，饮食宜清淡易消化，可以多吃高蛋白富含维生素的食物，如：牛奶、鱼肉、虾、瘦肉、鸡蛋，新鲜的水果蔬菜等。　　　　以上便是关于“试管婴儿促排卵第14天有什么反应”以及“试管婴儿促排卵期间注意事项”的相关介绍，希望能够有效帮助到大家。若大家对上述问题仍有疑问，或者有试管婴儿需求，可联系有喜网工作人员进行相关咨询。

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脂肪干细胞的郑大二附属有供卵的吗提取及鉴定 　　3.3.2 观察 细胞传代后，每天对细胞进行观察，注意污染与否、细胞贴壁和生长状态等 情况 消化传代。 此过程中所做处理同原代培养。 注意观察细胞五个时期的特点 （游 离期、吸附期、繁殖期、维持期、衰退期）。 细胞已基本铺满瓶壁形成致密单层，这时可进行再次传代培养。 4 细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞 免疫表型（CD29/CD44）的鉴定 4.1 在细胞镜下作形态学观察， 与正常形态比较 （原代培养后， 传代 2-3 次， ACSs 呈现单层，大而扁的细胞形态，其直径在 25-30um，待细胞达到汇合时，它 们形态上呈纺锤形，类似于成纤维细胞） 4.2 细胞周期分析 分别取生长融合达 30%-40%和 90%以上的第三代细胞，以 4°C 预冷的 70%冰 乙醇固定，4°C 放置 24 小时；用 PBS 洗涤 2 次；加入 RNA 酶 10ug 和碘化丙啶 （PI）0.3ml 重悬细胞（4°C，30 分钟）。

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用流式细胞仪以 FL2 红色荧光条件检 测。应用 Modfit LT 2.0 软件分析细胞周期。 取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型（CD29/CD44）的鉴 定。 4.2 细胞表面分子免疫标记的鉴定 a.方法：直接免疫荧光法 b．试剂及材料：单克隆抗体 CD29 PE，CD44 PE,及同型对照抗体；细胞洗 液：含 2%BSA、0.1%NaN3 的 PBS；固定液：1%多聚甲醛 PBS 液（pH7.2）；4、流 式细胞仪。 c．操作方法： 6 每个样品取 2 只，分别标记同型抗体作为阴性对照、待测，分别加入 10 个 /100ul 待测细胞。对同型对照管中加入荧光标记单克隆抗体 CD29 、CD44 对照 抗体作为阴性对照，待测管加入荧光标记单克隆抗体 CD29 PE，CD44 PE 为实验 管，各 20ul，混匀。置于于室温避光孵育 30 分钟，加入 2ml 的 PBS，郑大二附属有供卵的吗1200r/min 离心 10min，弃上清，郑大二附属有供卵的吗控干，加入固定液 0.5ml（染色缓冲剂）。

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先测同型对照， 再测实验管。软件采集数据，分析阳性细胞比例。 二、携带 PTN 表达基因的脂肪干细胞的获取及鉴定 1、实验技术及原理：运用基因转染技术，将带 PTN 基因的反转录病毒载体 转染到脂肪干细胞，抗生素 G418 和流式细胞仪筛选，得到 PTN 高表达的脂肪干 细胞。 2、具体操作： 2.1 材料及试剂： 2.2 脂肪干细胞的准备：被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将 直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需 应用胰酶处理成单细胞悬液， 重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿 的 60%为宜，转染当日，在转染前 4 小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞， 也需在转染前 4 小时换一次新鲜培养液。 2.3 将带 PTN 基因的反转录病毒载体转染到脂肪干细胞，带有 PTN 基因混合 物应当逐滴加入，尽可能保持一致，从培养皿一边到另一边，边加入边轻摇培养 皿，以确保均匀分布和避免局部高浓度。 2.4 用抗生素 G418 和流式细胞仪筛选，得到 PTN 高表达的脂肪干细胞 G418 筛选要做预试验确定最佳浓度， 将细胞稀释至 1000cell/ml， 每孔 100ul 加入有培养基的 24 孔板， 将每孔中的 G418 浓度稀释至 0,100, 200,300, 400,500, 600,700, 800,900, 1000,1100ng/ml 等１2 个级别, 培养 10-14 天，以最低细胞 全部死亡浓度为基准，一般 400-800 左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持 使用筛选浓度的一半 流式细胞仪分析：SHG-44、SHG-44-vect、SHG-44-重组 pcDNA3→单细胞悬 液→70%酒精固定→裂解细胞→核糖核酸酶消化→碘化丙啶染色→上机分析 G1 期 和 G2/M、S 期比例。